引言

线粒体——细胞的“能量工厂”——不仅是 ATP 的制造中心，更是细胞凋亡调控的关键枢纽。线粒体膜电位的下降被认为是细胞凋亡早期不可逆的标志性事件。如何精准、便捷地捕捉这一动态变化？Abbkine KTA4001 线粒体膜电位分析试剂盒，基于经典的 JC-1 荧光探针，为您提供新一代解决方案！

一、检测原理

在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质（matrix）中， 形成聚合物（J-aggregates），可以产生红色荧光（Ex/Em=585/590 nm）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体（monomer），可以产生绿色荧光（Ex/Em=510/527nm）。 这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。

(A）健康的线粒体会在线粒体嵴内积累JC-1。（B）受损的线粒体在线粒体外部积累JC-1单体。

（C） JC-1染料形态聚集体向单体的转变显示出不同的荧光。

二、核心优势

（1）信噪比高——双色比率法，排除实验变量

采用红/绿荧光比率衡量线粒体去极化程度，有效消除细胞大小、染料装载量、仪器波动等因素带来的批次间差异，数据更可靠。

（2）含 CCCP 阳性对照——质控无忧，结果放心

试剂盒内含 CCCP（强效线粒体氧化磷酸化解偶联剂），可作为阳性对照。用 CCCP 处理的细胞膜电位完全丧失，JC-1 染色后全部呈绿色荧光；而正常细胞应显示红色荧光，帮助验证实验系统是否正常。

（3）兼容性强——流式/荧光显微镜都适用

无需超速离心、酶标仪等复杂设备，KTA4001 为您提供开箱即用的全套组分——JC-1 Stain (50×)、CCCP (50 mM) 和 PBS (10×)，经过预制优化，批次间稳定性高，让您拿到手就能顺利开工。

 三、结果分析与数据解读

1.流式细胞术结果分析

设门策略：首先圈出活细胞群体（FSC/SSC），排除碎片和死细胞。

左上象限： 红色荧光强，绿色荧光弱。该区域的细胞具有较高的红/绿荧光强度比值。

右下象限: 红色荧光弱，绿色荧光强。该区域的细胞红/绿荧光强度比值降低，是线粒体膜电位降低的早期凋亡细胞。

右上象限: 红绿荧光双强。这部分细胞情况比较复杂，通常被认为是晚期凋亡或已死亡的细胞。

左下象限: 红绿荧光双弱。此区域主要为细胞碎片，在进行数据分析时，通常应在FSC/SSC散点图中预先排除。

2. 荧光显微镜结果分析

正常细胞：线粒体呈亮红色或橙红色点状/线状结构，绿色荧光很弱。
早期凋亡细胞：同一视野下，红色荧光减弱甚至消失，绿色荧光显著增强。

四、常见FAQ

1. 如何判断线粒体膜电位变化？

不能单独用红色或绿色荧光强度来判断线粒体膜电位，而必须使用红绿荧光的相对变化，即红绿荧光强度的比值作为指标来判断膜电位变化。以细胞群的平均红、绿荧光强度，计算红/绿荧光强度的比值（Ratio），根据重复实验数据，对Ratio进行统计，反映膜电位变化。流式分析时，相对于正常对照，凋亡阳性处理的细胞群会往右下方发生移动，即红色荧光减弱，绿色荧光增强，这表明阳性处理导致线粒体膜电位下降。

2. 样本带绿光能用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位吗？

样本带绿色荧光不太适合用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位，因为GFP/EGFP荧光对FITC和PE通道都有干扰，建议用与GFP没有荧光溢漏的线粒体探针进行检测。

3. JC-1 染色前，可以先固定细胞吗？

不可以，JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位的。固定会破坏电势，导致探针无法聚集在线粒体上，而失去特异性。

4. JC-1 染料聚集可如何进行优化？

①JC-1工作液稀释：可以按照1:100稀释JC-1Stain(50×)。

②洗涤的时候可以用冰预冷的1×PBS，如果是有沉淀可添加终浓度0.1%的吐温-20。

5. 阴性对照细胞死亡较多怎么优化？

①染色时，细胞培养基和JC-1 Working Solution应1:1使用，在染色洗涤完之后应尽快上机检测。

②可适当降低JC-1 Working Solution中探针浓度，比如1:100-1:200。

相关产品推荐